4. INFERTILIDADE EM CADELAS COM CICLOS ANORMAIS

(Birchard, SJ e Sherding, RG, 1994)

      A infertilidade ou subfertilidade em cadelas com alterações no ciclo estral nem sempre decorre da alteração em si, e sim freqüentemente por cruzamentos realizados em momentos inadequados.

      4.1 Anestro persistente

      Os animais que se encontram em anestro persistente podem ser divididos em duas subcategorias: aqueles que nunca tenham ciclado (anestro primário) e aqueles em que tenha ocorrido um ou mais ciclos prévios, mas que não estejam mais ciclando (anestro secundário). (Jonhston,SD et al, 1994)

      4.1a  Anestro primário (Puberdade tardia)

Causas: (Nelson, RW e Couto, CG)

variabilidade normal

estro não detectado

maturidade atrasada (genético ou nutricional)

Intersexo (desordens cromossomais, uso de andrógenos)

Iatrogênico (administração de andrógenos ou progestágenos)

desordens relacionadas ao eixo HPO (por exemplo neoplasias, insultos traumáticos)

defeitos endócrinos (hipotireoidismo, diabetes mellitus ou desordens da adrenal)

DIAGNÓSTICO

Histórico

*determinar método e freqüência de detecção de estro, eliminar possibilidade de ter ciclado despercebidamente.

*descartar ovariohisterectomia prévia.

*animais com menos de 24 meses podem ser pré-púberes.

*descartar possibilidade de tratamento anterior com progestágenos e andrógenos, que poderiam suprimir sinais de ciclicidade, durante o tratamento ou por algum tempo após este.

*cadelas idosas podem ter ciclado muitas vezes e deixado de ciclar.

Exame físico

*avaliação física geral para determinar se o estado de saúde é compatível com a ciclicidade (condição corporal adequada) para sinais de estro e proestro.

*exame para doenças sistêmicas que possam interferir na ciclicidade.

*exame para evidenciar intersexo.

*exame para evidenciar disfunções endócrinas, como hiperadrenocorticotismo, hipotireoidismo, nanismo hipofisário.

*Avaliação laboratorial

*Realizar contagem completa sangüínea, urinálise e perfil bioquímico, se indicado.

*Citologia vaginal para obter informação do estágio do ciclo estral, e se o ciclo é normal ou não e a presença de metrite, piometra, cervicite ou vaginite.

*Pesquisa de B. canis

*Mensuração basal dos níveis de T₃ e T₄ , e de FSH (teste de estimulação da tireóide com TSH)

*Teste endócrino:

- análise de progesterona sérica a cada 1-2 semanas. Concentração maior que 2ng/ml é sugestiva de corpo lúteo funcional

- concentração de LH maior que 30ng/ml em três amostras consecutivas, com intervalos de 20 minutos, sugere ovariectomia ou hipoplasia/aplasia ovariana

*Cariotipagem, recomendada em animais:

     - com evidência de genitália externa anormal

     - com histórico de nunca terem ciclado

- acima de 18 meses de idade sem evidência de ciclicidade, após 6 meses de esfregaços vaginais semanais

*Ultra-sonografia do trato reprodutivo: fornece informações da presença ou ausência de aumento uterino, e/ou acúmulo de fluidos e alguma anormalidade, como massas ovarianas

*Laparoscopia/ Laparotomia: considerar como um método de avaliação do trato reprodutivo

*TRATAMENTO

*Animais com cariótipo anormal: recomenda-se castração

*Animais com cariótipo normal que não ciclaram até os 30 meses, são candidatos para indução do estro. Alguns protocolos para indução do estro:

 - administrar FSH 1-2mg, pela via subcutânea ou intramuscular, nos dias 1, 3, 6 e 9, realizando citologias vaginais em cada um desses dias. Quando a citologia revelar 80% de células superficiais, cruzar a cadela e administrar hCG 500-1000UI, pela via intramuscular ou intravenosa

 - administrar FSH 2mg/dia por 5-10 dias, seguido de hCG como acima

 - administrar FSH 25mg semanalmente, num total de 5 doses. Quando a cadela entrar em proestro, descontinuar FSH e realizar citologia vaginal. Administrar hCG como acima e cruzar

 - se a cadela demonstrar sinais de proestro e retornar a anestro, fornecer 25mg, 10mg e 5mg de FSH em dias sucessivos, seguindo de cruzamento e hCG

*Neoplasias: remoção cirúrgica dos tumores ovarianos

*Desordens endocrinológicas: esquemas de tratamento para hiperadrenocorticotismo, nanismo hipofisário, hipotireoidismo, e hipertireoidismo

      O anestro secundário pode ocorrer em qualquer época após a puberdade e pode ser presenciado em situações onde:

*O eixo hipotálamo - hipófise - ovários (HPO) esteja sendo suprimido, como no hipotireoidismo, terapia exógena com glucocorticóides, ou doença metabólica simultânea, stress, má nutrição.

*Exista uma anormalidade primária no eixo HPO, como disgenesia ovariana (cadelas com essa patologia apresentam aumento crônico os níveis plasmáticos de LH), condições de intersexo, cistos ovarianos, neoplasias ovarianas ou ainda ovariohisterectomia prévia.

      Deve-se ainda considerar novamente a possibilidade da cadela ter ciclado sem que o proprietário percebesse.

DIAGNÓSTICO

Histórico:

*senilidade (maior de 6-8 anos) pode estar associada com redução da fertilidade e ciclicidade irregular

*algumas raças com híbrido de lobo e basenjis podem ciclar apenas uma vez por ano

*avaliar a acurácia das observações para sinais de estro

*analisar evidências de stress severo como doença, má nutrição, debilidade, e também temperatura externa, que podem suprimir sinais de proestro/estro ou prolongar anestro

*descartar a possibilidade de tratamento com progestágenos ou andrógenos

*Exame Físico:

*realizar exame físico geral para avaliar doenças sistêmicas

*examinar evidência clínica de disfunção endócrina como hipotireoidismo, hiperadrenocorticotismo

*Avaliação Laboratorial:

*citologias vaginais semanais

*pesquisa de B. canis

*mensuração das concentrações basais de T₃ e T₄ e/ou teste de estimulação com TSH

*realizar o teste endócrino (idem falha no ciclo)

*contagem completa sangüínea, perfil bioquímico, urinálise, se indicado

*cariotipagem em animais acima de 18 meses que falharam em ciclar após 6 meses de exposição a outras fêmeas ciclantes e machos

*Ultra-sonografia: fornece informações sobre o tamanho do ovário

*Laparoscopia/Laparotomia: devem ser consideradas para avaliar o trato reprodutivo

TRATAMENTO

*Colocar a cadela com outras fêmeas ciclantes e a expor regularmente ao macho

*Indução de estro como descrito para o tratamento de falha em ciclar

* Remoção cirúrgica de neoplasias ovarianas

* Não existe tratamento para o declínio de fertilidade visto em cadelas idosas

      4.2 Proestro/Estro persistente

      O período proestro + estro não é considerado anormal em cadelas até ultrapassar 35-40 dias, e pode ser caracterizado por uma cadela apresentando sangramento vaginal por mais de 20 dias (proestro prolongado) ou aceitando o macho por mais de 20 dias (estro prolongado) (Drazner, FH, 1987). Há um atraso do desenvolvimento folicular mas a ovulação subseqüente ocorre.

      A persistência do proestro/estro pode acontecer em conseqüência de: (Hosken, RF, 1994)

*cistos ovarianos foliculares funcionais

*administração exógena de estrógeno

*neoplasias ovarianas produtoras de estrógeno

DIAGNÓSTICO

*Histórico:

*descartar a possibilidade de tratamento com produtos estrogênicos

Exame Físico:

*avaliação física geral

*exame da genitália externa, procurando por evidências de influência estrogênica (vulva aumentada, edemaciada e descarga vulvar) e massas abdominais como tumores ovarianos

Avaliação Laboratorial:

*citologia vaginal pode demonstrar presença de influência estrogênica, determinada pelo grau de cornificação e presença ou ausência de glóbulos brancos, vermelhos e debris do fundo do esfregaço

*proestro persistente : 50 a 90 % células superficiais totalmente queratinizadas

*estro persistente : 90% ou mais de células superficiais totalmente queratinizadas

*teste endocrinológico: concentrações de estrógeno maiores que 15pg/ml são sugestivas de proestro ou estro, contudo níveis estrogênicos normais não descartam a possibilidade de estro persistente.

*Ultra-sonografia do trato reprodutivo pode descartar ovários aumentados e estruturas foliculares nos ovários

*Radiografias do abdômen podem fornecer informações sobre presença de ovários aumentados e massas ovarianas

TRATAMENTO

*Induzir ovulação ou tecido luteal com hCG (500-1000UI, pela via intravenosa ou intramuscular) ou GnRh (50-100μg, pela via intravenosa ou intramuscular). Checar os animais utilizando Ultra-som, citologia vaginal e análise de progesterona sérica antes do tratamento e 14 dias após o tratamento para monitorar a resposta

*Administrar terapia andrógena por 3 a 4 meses e depois cruzar no estro subseqüente

*Recomenda-se ovariohisterectomia para cadelas que não haja intenção de cruzamento

*Remoção cirúrgica dos ovários neoplásicos

      4.3 Ninfomania (Derivaux, J.)

*Síndrome neuroendócrina que é traduzida do ponto de vista clínico, por um prolongamento do cio além dos limites normais, podendo transformar-se em permanente por exagero do impulso sexual

*Geralmente este distúrbio está associado com degeneração cística do ovário, sendo mais raramente reflexo de tumores da granulosa

*Etiologia: múltipla e variada, freqüentemente condicionada a uma predisposição hereditária

*Depende essencialmente de uma síndrome hipotálamo-hipofise-ovário e os sintomas observados apontam a favor de um desequilíbrio FSH-LH no sentido de uma ação predominante de FSH

*Não ocorre ovulação e formação de corpo lúteo e, de outra parte, o folículo continua crescendo sob o efeito de um relativo excesso de FSH

 LESÕES

*tanto um como ambos os ovários podem apresentar folículos relativamente grandes

*é possível também a ocorrência de grande número de cistos de pequenas dimensões, alguns destes cistos são recobertos interiormente por fina camada de tecido luteínico, porém a maioria possui parede delgada, semitransparente, contendo líquido claro

*por vezes, no ovário permanece muito pouca quantidade de tecido são

*as células da granulosa estão ausentes ou degeneradas, e as da teca interna sofrem a mesma alteração ou apresentam fenômenos de hialinização ou de infiltração serosa

*o miométrio torna-se espesso e edemaciado, a mucosa uterina irregularmente hiperplásica, as glândulas uterinas císticas e a submucosa aparece infiltrada de linfócitos e de células plasmáticas

SINTOMATOLOGIA

*estado de hiperfoliculenemia

*distúrbios psíquicos

* indícios físicos

*modificações do ciclo estral

DIAGNÓSTICO

*Diferenciar dos cios prolongados com ovulação retardada e do virilismo

TRATAMENTO

*Com gonadotrofina coriônica, ou com progestágeno, especialmente a medroxiprogesterona; os resultados são irregulares

*Em caso de fracasso do tratamento médico, pode-se recorrer à castração; assim se consegue o retorno à quietude sexual

      4.4 Intervalos interestros diminuídos

      Intervalos com menos de 4 meses são freqüentemente observados em cadelas. Muitas são inférteis provavelmente por falha na implantação do embrião, já que o endométrio ainda não está recuperado do ciclo anterior, um processo que normalmente necessita de 120-150 dias. (Nelson, RW e Couto, CG, 1992)

      A administração de gonadotrofinas ou estrógenos pode diminuir o intervalo interestro, mas para a maioria das cadelas a causa é desconhecida, suspeita-se que essa patologia seja originada por concentrações insuficientes de progesterona, havendo falha na ovulação ou luteinização. Devem ser diferenciados de split heats. (Drazner, FH)       

DIAGNÓSTICO

Histórico:

*determinar métodos e freqüência de detecção de estro, eliminar a possibilidade de ter ciclado despercebidamente

*assegurar que o intervalo interestro seja menor que 4 meses

*descartar possibilidade de tratamento com compostos hormonais como estrógenos

Exame Físico:

*avaliação física geral

*observar o comportamento da fêmea frente ao macho intacto

Avaliação Laboratorial:

*realizar citologia vaginal para confirmar que a cadela está em estro

*considere teste endócrino, incluindo concentração de estrógeno e progesterona

TRATAMENTO

*Induzir a ovulação (ver anestro persistente), quando é comprovado pela citologia e análise de progesterona que o animal está em estro; seguindo de cruzamento

*Administrar terapia andrógena (mibolerone-30μg/lb 1x ao dia, via oral- no máximo 180μg)  por 3 a 4 meses e então cruzar no estro subseqüente; esse tratamento não é recomendado em cadelas menores de 3 anos, porque estas apresentam irregularidade no ciclo estral

*Ovariohisterectomia é recomendada para animais que não haja intenção de cruzar

      4.5 Split heats

      Uma cadela que apresente split heats demonstra sinais de proestro, como sangramento vaginal , intumescimento de vulva, e atrai machos, entretanto não mantém o cio entrando em aparente diestro seguido por novo proestro 2-10 semanas depois. Isso pode repetir-se por muitas vezes.(Feldman,EC e Nelson, RW )

      Acredita-se que cada proestro esteja acompanhado de desenvolvimento folicular e secreção de estrógeno, contudo a ovulação não ocorre e os folículos tornam-se atrésicos. Então, um novo grupo de folículos se desenvolve, aumentam os níveis de estrógeno, expondo novamente a cadela aos sinais de proestro. ( Perkins,NR e Thomas, PGA, 1993)

      Podem ser confundidos com proestro e estro persistentes ou com intervalos interestros diminuídos.

      A causa ainda é discutida mas acredita-se que pode ser devido à dor resultante da monta, intimidação durante o início do estro ou atresia idiopática dos folículos. ( Nelson, RW e Couto, CG, 1992)

      É freqüentemente observado em cadelas jovens, que posteriormente apresentam ciclos normais.( Perkins, NR e Thomas, PGA, 1993). Raramente ocorre repetidamente em uma mesma cadela. ( Nelson, RW e Couto, CG, 1992)

      Normalmente é uma anormalidade temporária e não requer tratamento. (Nelson, RW e Couto, CG, 1992)

      4.6 Intervalos interestros aumentados (Nelson, RW e Couto, CG, 1992)

      Intervalos interestros maiores que 9 meses são considerados anormais em cadelas. ( Feldman, EC e Nelson, RW, 1987). Deve-se consirerar, entretanto, a variação racial.

      Causas:
      Normalmente são as mesmas presenciadas para anestro persistente, em especial o hipotireoidismo e a administração de glucocorticóides.

      Pode ocorrer também em cadelas mais velhas.

DIAGNÓSTICO

Histórico:

*rever as técnicas de detecção de estro

*terapias anteriores, medicações

Exame Físico:

*estado geral e metabólico do animal

Avaliação laboratorial:

*Contagem sanguínea

*Painel bioquímico

*Urinálise

*Função tireóide

TRATAMENTO

      Em cadelas sem nenhuma patologia primária que esteja causando o prolongamento dos intervalos pode-se induzir o estro com FSH e LH ou hCG. (Ettinger, SJ, 1992)

      4.7 Cio silencioso

      É um termo utilizado para descrever uma condição onde as cadelas apresentam ciclos que endocrinologicamente são normais, porém falham em exibir qualquer manifestação externa de cio.

      Podem ser confundidos com anestro persistente, mas nesse caso o estro está ocorrendo, só que despercebidamente.            

      Em alguns casos essa falha em demonstrar cio têm sido relacionada a níveis inadequados de 17β-estradiol, LH e progesterona ou uma resposta pobre a esses hormônios. Essa condição também tem sido reportada em cadelas criadas afastadas desde cedo de outros cães, causando uma lacuna de estimulação psicológica. (Drazner, FH, 1987)     

      Alguns autores consideram que cio silencioso seja qualquer situação onde o ciclo esteja ocorrendo sem ser detectado seja porque a cadela seja porque a cadela não apresente alguma secreção vulvar ou seja porque a cadela tem um comportamento de higiene muito acentuado e não permita que a secreção seja percebida. (Freshman, JL , 1991)

DIAGNÓSTICO

Avaliação Laboratorial:

*realizar a mensuração da progesterona sérica: ( Nelson,RW e Couto, CG, 1992)

*1.O - 1.9 ng/ml indica ovulação em 3 dias

*2.0 - 2.9 ng/ml indica ovulação em dois dias

*3.0 - 3.9 ng/ml em um dia

*4.0 - 8.0 ng/ml ovulação naquele dia

*> 2 ng/ml pode indicar cio silencioso

*Citologia vaginal para confirmar o estro.

TRATAMENTO

      O tratamento não é necessário, mas fêmeas afetadas provavelmente não aceitem o macho, portanto se houver interesse em cruzamento deve -se realizar inseminação artificial, monitorada pela citologia vaginal ou análises hormonais, (Nelson, RW e Couto, CG) considerando que o melhor dia para o cruzamento ou inseminação para tamanho máximo de ninhada é dois dias após ovulação ( Kustriz, R, 1999)

      4.8 Estro diminuído (Nelson, RW e Couto, CG, 1992)

      Normalmente estro com menos de 3 dias de duração é decorrente de erros na observação ou reconhecimento do estro.
      Pode realmente estar ocorrendo em cadelas com mais de 6-8 anos, e em alguns indivíduos pode ser considerado normal.
      Não traz conseqüências significantes, apenas deve-se detectar o proestro/estro com auxílio de outros métodos para poder realizar o cruzamento com sucesso no tempo apropriado.

5. CASOS NA LITERATURA

          5.1 Proestro prolongado em cadelas com X monossomia cromossômica (77,X0)

(Löfstead, RM et al, 1992)

          Uma cadela de 9 meses de idade da raça Esquimó americano miniatura com  proestro persistente tinha o seguinte histórico: aos 7,5 meses de idade a cadela começou a apresentar edema vulvar com descarga proestral. Depois de 42 e 50 dias, a cadela foi tratada com 500 UI de gonadotrofina coriônica humana em cada dia para induzir ovulação, presumindo que ela tivesse cisto ovariano. O tratamento não foi efetivo, 59 dias depois do início do proestro, a vulva continuava inchada e a citologia vaginal era consistente com o proestro. Nesse momento, a concentração de progesterona sérica era 0,1 ng/ml e a concentração de estrógeno sérico total era 241pg/ml. A concentração estrogênica era compatível com proestro e a baixa concentração de progesterona evidenciava que a cadela não tinha ovulado ainda. Durante o período do proestro prolongado, mas especialmente no seu início, a cadela era atrativa para os machos.

          Esses machos freqüentemente tentavam montar nela, porém a cadela deitava passivamente e não permitia a monta.

          Dois meses após o início do proestro, a cadela recebeu outras duas injeções de gonadotrofina coriônica humana (cada 150UI, IM) ,sendo que entre as injeções houve um intervalo de 5 dias. Após duas semanas o esfregaço vaginal indicou que a condição dela não havia mudado. Ela foi então tratada com 1mg de FSH IM 12/12horas por 5 dias seguido de 10μg de GnRH IM no sexto dia. Isto foi feito porque o FSH tinha sido relatado como indutor de sítios de receptor para LH nas células granulosas do folículo ovariano. Contudo, análises do esfregaço vaginal feitas 3 e 18 dias depois (3 a 3,5 meses após o início do proestro) indicaram que esse tratamento também tinha falhado na indução da ovulação. Nesse momento, a concentração total de tiroxina sérica era normal. O teste de estimulação com hormônio estimulador da tireóide não foi feito.

          Após 4,5 meses de sinais contínuos de proestro, consistindo em atração pelos machos, edema vulvar, descarga vulvar hemorrágica intermitente, e a citologia vaginal indicava normalmente mais de 80% de células superficiais. Um exame físico não revelou anormalidades exceto pela pelagem escassa.

          De acordo com o proprietário, a cadela era pequena para a idade dela. Às seis semanas ela pesava 1,6 Kg, considerando que a média do peso de suas 5 irmãs era 2,7Kg. Na opinião do proprietário, a aparência facial da cadela era incomum, porque suas orelhas eram inseridas baixas na cabeça dela e eram muito afastadas e por isso apontavam para fora ao invés de para cima.

          A vagina da cadela foi examinada usando um endoscópio flexível 9mm e esta foi encontrada sendo grosseiramente normal. A cérvix não pôde ser visualizada, mas isso é comum durante o proestro, especialmente quando um endoscópio com 9mm de diâmetro é usado numa cadela desse tamanho. Por base do comprimento do vestíbulo e da vagina dela (19cm), foi sugerido que não havia aplasia segmentar desta parte do trato reprodutivo. Nesse momento, a vulva da cadela estava aumentada e sua citologia vaginal era consistente com proestro atrasado. Devido à história incomum da cadela, a análise do cariótipo foi feita pelo sangue dela e o diagnóstico de 77,XO foi retornado.

          Depois de 7,5 meses de proestro contínuo ela foi ovariohisterectomizada e o cariótipo do sangue e da pele foram examinados. Em 30 esfregaços de linfócitos e 30 esfregaços de fibroblasto da pele todas as células tinham cromossomo 77,XO. Além disso, em 500 neutrófilos examinados “drumsticks” não foram encontrados. Cadelas normais devem ter cariótipos 78,XX com aproximadamente 4% de “drumsticks”.

          Um dia antes da ovariohisterectomia, essa cadela continuava com vulva inchada e a citologia vaginal era condizente com proestro. Uma baixa concentração de progesterona sérica (0,2 ng/ml) naquele dia indicou que ela não tinha ovulado. A concentração de testosterona sérica foi mensurada porque esta tinha sido encontrada baixa em outra cadela com XO monossomia, mas nessa cadela ela era normal com 0,04ng/ml. Com 1 semana após a ovariohisterectomia, a descarga hemorrágica cessou e o edema vulvar regrediu.

          Os ovários eram aproximadamente 8x6x6 mm e  no exame histológico não havia evidência de nenhum desenvolvimento folicular. Isso foi inesperado devido à persistência da aparência proestral e seu rápido desaparecimento depois da ovariohisterectomia. O epitélio germinal pareceu estar em um  estado de degeneração. Não havia corpo lúteo ou corpo albicans. Contudo havia esferas ou cordões epiteliais observadas com grande abundância. Nas esferas mais largas havia células com nucléolo proeminente que tinham citoplasma vacuolizado. Estas eram parecidas com células em um corpo lúteo ativo e foi concluído que elas podem ter sido ativadas esteroidogenicamente.

          Uma população grande de células parecidas com linfócitos também estava presente nessas esferas epiteliais o que sugeriu que uma resposta imune pode ter sido envolvida na degeneração do ovário.

          As tubas uterinas pareceram estar bem desenvolvidas e eram revestidas por epitélio ciliado proeminente. O útero era grosseiramente normal, mas havia uma condição cística das glândulas uterinas. Isso era inesperado porque era conhecido que não havia estrutura luteal nos ovários e o útero não tinha sido exposto a altas concentrações prolongadas de progesterona. Isso indicou que o estrógeno pode ser importante na patogênese da hiperplasia cística endometrial, apesar do estrógeno sozinho ter mostrado ser incapaz de induzir cistos glandulares. Havia uma indicação de que essa cadela pode ter tido um estado de piometra anteriormente porque havia um acúmulo de granulócitos em uma parte do lúmem uterino.

          Esse caso foi incomum por diversas razões. Primeiro 77,XO é raro em cães, pelo o que se sabe esse é o segundo caso relatado. Essa cadela no estado de proestro persistente não apresentou: hipertrofia clitorial, alta concentração sérica de testosterona, baixa concentração sérica de estradiol, aplasia na parte cranial de um corno uterino; no entanto ela apresentou: disgenesia gonadal, deformação facial e tamanho do corpo pequeno.

          Dois anos após ter sido ovariohisterectomizada, foi encontrada sua concentração basal sérica de LH entre 10,4 e 13,7 ng/ml e sua concentração de FSH entre 1,005 e 2,004 pg/ml. Quando foi injetado 100μg de GnRH  IM na cadela , sua concentração sérica de LH aumentou 5 vezes acima  do valor padrão.

          5.2 Indução do estro em cadelas com anestro normal e persistente usando gonadotrofina menopausal humana (hmg)
          (Wanke, MM et al , 1997)

          Resumo: A hMG foi administrada IM em 10 cadelas durante um anestro aparentemente normal (n=7) ou anestro persistente (n=3). Cada cão recebeu uma  dose de 75UI de hMG (75UI LH, 75UI FSH; 1- 7 unidades/Kg) diariamente por 9 dias. Nove cadelas responderam com sinais óbvios de proestro entre 3 e 9 dias; entre elas, 3 tiveram um proestro fraco, 2 apresentaram estro normal e ovulação, mas falharam na concepção e 4 ficaram prenhes no ciclo induzido e geraram ninhadas normais após 72 a 85 dias do começo do tratamento (incluindo a cadela tratada em 24 meses depois do último estro). Em 2 casos, o tratamento resultou em ovulação seguida  de 25 ou 34 meses de anestro puberal crônico, sendo que uma delas ficou prenhe. Os resultados sugerem que hMG pode ser uma útil preparação gonadotrófica para indução de estro em cães.

          Introdução: As cadelas são animais monoéstricos, sendo que o anestro varia de 2 a 10 meses seguido de 2 meses de fase luteal de ciclo de prenhez ou não-prenhez. O intervalo interestro normal é entre 5 a 12 meses.

          As razões clínicas para a indução de estro são: cadelas com anestro persistente e cadelas puberdade tardia.

          Muitos protocolos de indução de estro com gonadotrofinas, pulsos de GnRH, injeção ou infusão de agonista de GnRH e agonista dopaminérgico têm sido relatados na indução do estro em anestros de cadelas. Em alguns casos os resultados não são satisfatórios para o uso clínico, enquanto que em outros casos a preparação de hormônio requerida não é permitida para uso veterinário em muitos países.

          Material e Métodos:Foram utilizados 10 animais saudáveis em anestro de várias raças com peso entre 11 a 70 Kg. O dia do anestro foi determinado usando a história contada pelos proprietários. O anestro foi confirmado em cada cadela baseando-se no nível sérico de progesterona <1ng/ml determinado por ensaio imunoenzimático e ausência de células superficiais ou intermediárias no esfregaço vaginal .

          Duas cadelas de 25 e 34 meses de idade nunca haviam exibido estro antes. As outras 8 cadelas estavam em estágios conhecidos depois do estro anterior; incluindo 7 cadelas anestro-normal, em cinco a oito meses aproximadamente depois do último estro, e uma cadela anestro persistente, com aproximadamente 24 meses depois do último estro.

          Tratamento: Cada cadela recebeu diariamente uma injeção IM de hMG (75 UI de LH e 75 UI de FSH por 75 UI ampola). A droga liofilizada foi diluída em 3 ml de solução salina imediatamente antes da injeção.

          Das 10 cadelas 7 receberam injeções diárias de 75 UI hMG por 9 dias. Em 2 cadelas o tratamento foi interrompido por 1 dia (dia 4 ou 5) e então continuado até a nona injeção. Em um caso, o tratamento foi interrompido depois de 7 dias devido à resposta antecipada de proestro da cadela.

          O dia da primeira injeção de hMG foi considerado o dia 0 de tratamento.

          Observação e Cruzamento: Durante o tratamento as cadelas foram examinadas diariamente, incluindo esfregaço vaginal e observações de edema vulvar, vaginoscopia e descargas serosanguinolentas.

          Os esfregaços vaginais foram obtidos e classificados, tendo sido corados através do método tricrômico de Schorr. seguido de fixação com spray citológico comercial. Índices eosinofílicos também foram determinados.

          As cadelas foram testadas para comportamento estral diariamente, começando quando o esfregaço vaginal apresentava  ≥ 90% de células epiteliais superficiais. Os cruzamentos foram permitidos dias depois da observação do estro.

          LH e Progesterona séricos: Com poucas exceções, as amostras de sangue foram obtidas 1 a 2 dias antes do tratamento, no primeiro dia do tratamento e em dois dias consecutivos durante o tratamento.

          Nas cadelas que responderam com proestro, o sangue foi coletado de um a cinco dias de intervalo do médio-proestro (50% de cornificação) até o nível sérico de progesterona ser maior que 7,5 ng/ml baseado no nível de progesterona .

          Em 2 cadelas as amostras foram colhidas diariamente enquanto que em outras duas as amostras foram colhidas a cada 3 a 4 dias durante a indução do proestro e estro.

          A progesterona foi determinada por RIA em todas as amostras e o LH foi determinado nas amostras coletadas durante o período de crescimento ovulatório.

          Para cada ciclo induzido, o dia de surgimento de LH pré-ovulatório foi determinado baseado nos picos de LH detectados pela análise de LH (n=3) ou por interpolação baseado no tempo de aumento inicial de progesterona (n=3), mas excluindo os dias que o LH não aumentou.

          A ovulação foi considerada como ocorrida se a concentração de progesterona fosse  ≥ 2ng/ml por ≥ 10 dias ou se a prenhez ocorresse.

          Resultados: Das 10 cadelas 9 mostraram proestro, edema vulvar, descarga serosanguinolenta e aumento do número de células epiteliais no esfregaço vaginal entre 3 a 9 dias de tratamento. Três cadelas apresentaram edema vulvar e descarga serosanguinolenta pouco significativas durando somente 2 a 3 dias. Seis cadelas demonstraram forte resposta de proestro ( ≥ 90% de células superficiais no esfregaço e evidente comportamento estral ). A ovulação ocorreu durante um estro aparentemente normal. Dessas cadelas 4 ficaram prenhes e pariram ninhadas normais. A resposta inicial foi semelhante em 3 das 4 cadelas: o proestro começou no sexto ao décimo dia e durou 9 a 11 dias, o estro iniciou-se do décimo sexto ao vigésimo dia e durou 6 a 8 dias. A primeira elevação na progesterona ≥ 1 ng/ml e/ou pico de LH ocorreu do décimo quinto ao décimo nono dia.

          As gestações foram normais e as cadelas deram filhotes nos dias 82, 83 e 85 dias após o início do tratamento.

          Nas 4 cadelas que ficaram prenhas o proestro começou no terceiro dia e uma cornificação vaginal extensiva ocorreu no sexto dia. O tratamento foi interrompido após o sexto dia para evitar superestimulação ovariana. O primeiro crescimento de progesterona e o pico de LH ocorreram no sétimo dia. As cadelas foram inseminadas no nono e décimo segundo dia e um filhote foi removido por cesariana 71 dias após o começo do tratamento.

         Cada uma das 4 gestações foi normal e resultaram em ninhadas de 1 a 13 filhotes cada. A média do tamanho da ninhada foi de 6,7 ± 2,1 filhotes. O intervalo proestro, estro, surgimento do LH e parto foram 6 ± 1, 16 ± 2, 14  ± 1 e 80 ± 3 dias do começo do tratamento respectivamente

         Duas cadelas ovularam mas não ficaram prenhas. Em uma delas, o proestro e estro foram breves, mas a progesterona aumentou no décimo sexto dia e ficou elevada por ≥ 40 dias. A outra teve proestro e estro similar àquelas que ficaram prenhas, com tudo a duração de função luteal além de 10 dias não foi determinaram.

         As cadelas de resposta fraca mostraram apenas pequenos acréscimos na porcentagem de células epiteliais cornificadas (15 a 20 %). As 6 cadelas restantes apresentaram > 90% de células superficiais pelo oitavo a décimo quinto dia e um índice máximo eosinofílico atingindo 53  97% no oitavo a vigésimo quinto dia.

         Para cada cadela com esfregaço vaginal semelhante ao estro, oportunidades de cruzamento foram fornecidas cada 2 a 3 dias depois do começo do estro até o início do diestro.

         Todas as 6 cadelas aceitaram monta natural e mostraram comportamento estral normal. Em cada uma das 6 cadelas a concentração de progesterona ficou elevada acima de 15ng/ml enquanto que não havia acréscimos detectáveis nas 4 cadelas que não ovularam.

         Das 10 cadelas nove retornaram ao estro entre 1,5 a 12 meses após o tratamento. Nas 4 cadelas não-ovulatórias o próximo ciclo ocorreu 42 a 114 dias depois do início do tratamento. Das 6 cadelas que ovularam cinco tiveram o próximo ciclo entre 240 a 360 dias após o ciclo induzido.

         A cadela que não havia exibido ciclo antes do tratamento não teve um segundo ciclo durante 600 dias de observação após o estro induzido.

         A dosagem diária de hMG relativa para o peso corporal nas 6 cadelas que ovularam (4,1±2,2 UI/Kg) não diferiu (P>0,2) das 4 cadelas que não ovularam ou que responderam com proestro (2,5±1,1 UI/Kg).

         Discussão: O hMG é capaz de induzir estros férteis em cadelas. A porcentagem de prenhez de 40% para as cadelas tratadas é semelhante ao reportado para outros regimes gonadotróficos (PMSG ou FSH apenas, ou em combinação LH ou hCG).

         A dose de hMG por cão por dia foi selecionada por conveniência e não foi relacionada ao peso corporal. A dose diária resultante foi de 1,1 a 6,8 UI/Kg de peso corporal, mas não havia indicação clara de resposta dose-dependente.

         Em 5 cadelas as ovulações ocorreram vários dias após o final do tratamento. Nestas cadelas a ovulação foi espontânea e ocorreu em resposta a uma carga endógena de gonadotrofina, que ocorreu como resultado da indução da fase folicular pelo hMG, e não foram respostas intensas as injeções individuais de hMG.

         Três cadelas em considerável anestro prolongado responderam ao tratamento e ovularam enquanto que uma delas não ficou prenhe, isso pode indicar que induzir estro em cadelas de anestro prolongado pode ser mais fácil que em cadelas de ciclo normal.

         A cadela que ficou prenhe na indução do estro aos 25 meses de idade, mas depois falhou em ciclar novamente por mais de 600 dias pode representar um caso de defeito pituitário ou hipotalâmico. 

6. LEVANTAMENTO EM CLÍNICAS VETERINÁRIAS

         Um pequeno levantamento foi realizado em clínicas veterinárias na tentativa de ilustrar melhor a importância das alterações do ciclo estral e evidenciar como ocorrem estas patologias, em que grau, e se normalmente são diagnosticadas e tratadas.

         Para isso foi elaborado um questionário, englobando as principais questões sobre o assunto. Esse questionário, juntamente com uma carta de apresentação, foi deixado em 35 consultórios ou clínicas veterinárias na cidade de São Paulo, e enviado por e-mail para 44 consultórios ou clínicas veterinárias para várias cidades brasileiras, dois questionários foram enviados por fax. Destes questionários enviados  38 foram respondidos.

         Apesar de sabermos da ocorrência e importância dessas patologias, nos surpreendemos quando a maioria dos questionários respondidos apontava para uma incidência relativamente alta das alterações do ciclo estral.

         Contudo, outra surpresa foi perceber que apesar da literatura fornecer vários protocolos de diagnóstico e tratamento para as diversas alterações do ciclo estral, na prática muito pouco é realmente utilizado; segundo os questionários respondidos, em 76 % das vezes a causa não é diagnosticada,  principalmente por falta de interesse dos proprietários (43 %) e por falta de recursos financeiros (32 %) .

         Ainda quando a causa é diagnosticada raramente o tratamento é realizado, alguns médicos (as) veterinários (as) nos informaram que nunca haviam realizado tratamento específico. Quando o tratamento é feito, a maior motivação ocorre quando a saúde da cadela está sendo prejudicada (35 %), quando a anormalidade traz incômodo ao proprietário (29 %) ou quando há interesse em cruzar o animal (26%).

         Na nossa opinião, além do problema financeiro,  muitas alterações não são diagnosticadas e/ou tratadas porque o proprietário não vê vantagem nisto; quando não há interesse em cruzar o animal, e essa alteração não gera incômodos ao proprietário, ao contrário às vezes pode beneficiá-lo; evitando alguns transtornos como secreção vaginal sanguinolenta, atração de machos entre outros;  este então não vê motivos para realizar diagnóstico e tratamento, que muitas vezes é dispendioso e trabalhoso.

         Ainda que as técnicas de diagnóstico e tratamento apresentadas nesse trabalho não sejam aplicadas rotineiramente pelos médicos veterinários, é de fundamental importância para os criadores, já que uma cadela infértil traria grandes prejuízos econômicos a estes, portanto o tratamento certamente valeria a pena. Com o passar dos anos talvez essa realidade mude e as técnicas passem a ser difundidas e utilizadas com maior freqüência, até mesmo pelos proprietários de animais de estimação.

8.  AGRADECIMENTOS
     Gostaríamos de agradecer aos médicos (as) veterinários (as) que participaram deste trabalho, respondendo aos questionários :

Dr. Milton Kolber
Clínica Veterinária Dr. Milton Kolser - São Paulo - SP

Dra. Rosângela Pinheiro
Cãobelereiro Pet Shop - São Paulo - SP

Dra. Maria Mieko N. Duarte
Clínica de cães e gatos Dr. Kenji - São Paulo - SP

Dr. Christiano Ghiraldelli
Pet Shop Strauss - São Paulo - SP

Dr. Paulo César Medeiros
Midas Dog - São Paulo - SP

Dra. Augusta M. Kerbaly
Clínica Veterinária República do Líbano - São Paulo - SP

Dr. Wagner G. Mello
Pros Bichos, Produtos e Serviços Veterinários - São Paulo - SP

Dra. Margarete Preterote de Cunto
Alo Au Au  - São Paulo - SP

Dra. Simone M. Guimarães
Pet Dogstore - São Paulo - SP

Dra. Ana A. J. Torrello
Dog Service - São Paulo - SP

Dra. Maria Inês Baraúna
Clínica Veterinária Reino Animal - São Paulo - SP

Dr. Luiz Renato F. Rocha
Lar Dogs - São Paulo - SP

Dr. André Luiz P. Antunes
Pet'Spuma - São Paulo - SP

Dra. Alessandra C. Pires
Amicão Pet Shop e Clínica Veterinária - São Paulo - SP

Dra. Mariana Musolino
Gaia Veterinária - São Paulo - SP

Dra. Glória Satie Tominaga
O Cãotinho - São Paulo - SP

Dr. Maurício Macedo
Pet Life - São Paulo - SP

Dra. Márcia R. Gentile
Pet Palace - São Paulo - SP

Dr. Élio Ricardo de Creddo
Consultório Veterinário Dr. Élio Riicardo de Creddo - Cambé  - PR

Dr. Fernando César Patitucci

Dr. Amauri Miyashiro
Clínica Veterinária Itatins - Peruíbe - SP

Dra. Adriana Mincarone
 AM Guará - Porto Alegre - RS

Prof. Felipe Wouk

Clínica ARS Veterinária  - Curitiba - PR

Dr. Sidney Piesco de Oliveira
Anjo da Guarda - São Paulo - SP

Dra. Cristiane Nowicki e Dr. Adriano C. H. Macedo

Clínica Veterinária Pedigree - Jundiaí - SP

Dra. Silvana M. Souza e Dr. Cleibe Ferreira
Veterinária Animal Camp - Campinas - SP

Dra. Edylvia P. Costa e Dr. Rodrigo F. Flaquer

Stillo Animalis - São Paulo - SP

Dra. Ana Carolina P. Kindermann e Patrícia R. Ewjunjian

Cia dos Cães  - São Paulo - SP

Dr. Túlio Antônio Pinheiro

A Periquita - Taboão da Serra - SP

Dra. Maria Angélica de Lima

Quattro Lampe Pet Shop - São Paulo - SP

Dra. Janaína de Lima Nagatsu

Dog Company  - São Paulo - SP

Dra. Elizabeth Barrocos

Cobasi - São Paulo - SP

Dr. Alex Lafarti de Sena

Pet Care Hospital Veterinário - São Paulo - SP

Dra. Sabrina Fernandez

Clínica Veterinária Paulista - São Paulo - SP

Dra. Ana Paula Patali e Dr. Carlos Roberto Fernandes

Hospital Veterinário Cãovivência - São Paulo - SP

Dr. Carlos Augusto L. Luchetta

Call Vet Clínica Veterinária - São Paulo - SP

Dra. Francine Azevedo Silva e Dr. Dalton Escobar

Dog Fort - São Paulo - SP

10. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

DERIVAUX, J., 1980. Reprodução dos Animais Domésticos. Editora Acribia-Zaragoza.

Drazner, F.H., 1987. Small Animal Endocrinology. Churchill Livingstone, New York.

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http://lam.vet.uga.edu/LAM/LM000029.HTM

Carolina de Oliveira Ghirelli

Cristiane Musolino

Luciana Montel Moreno